今天，小編就結合實際案例跟大家分享如何快速新建指紋譜圖液相分析方法。

圖1. 中藥配方顆粒推薦色譜柱

指紋/特征圖譜粗篩色譜條件

(UPLC方法)

圖2. 梯度表

按照如上色譜條件，將提取的配方顆粒樣品集中進樣，結果如下：

圖3. 在ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱上進行樣品粗篩

 從譜圖可見：

• S1、S2、S3、S5、S6中組分少，峰形對稱，可在此基礎上優化梯度；

• S4、S7、S8組分復雜，先調整梯度，使峰均勻分布后，再考察色譜柱、柱溫、流速等對分離效果的影響。

  優化案例一：升麻

   調整洗脫梯度，使峰分布更均勻。

圖4. 升麻優化結果

  優化案例二：旋覆花

• Step1：優化梯度，使峰均勻分布

圖5. 旋覆花-梯度優化

• Step2：考察添加劑濃度

圖6. 旋覆花-添加劑濃度對分離的影響

• Step3：篩選色譜柱

圖7. 旋覆花-色譜柱對分離的影響

• Step4：確定色譜條件，如有必要可繼續優化。

圖8. 旋覆花在BEH Shield RP18色譜柱上的分析結果

指紋/特征圖譜粗篩色譜條件

(HPLC方法)

• 儀器：ACQUITY Arc

• 色譜柱：CORTECS T3，2.7μm，4.6×150 mm（PN:186008495）

• 流動相A：0.1%磷酸  

• 流動相B：乙腈

• 流速：1.0 mL/min

• 波長：205 nm+全波長         

• 柱溫：30度

• 進樣量：5 μL

圖9. 梯度表

按照上述條件粗篩樣品，再按照上文中的方式優化條件即可。

圖10. 在CORTECS T3色譜柱上進行樣品粗篩

總結

綜上，在ACQUITY UPLC HSS T3/CORTECS T3色譜柱上，使用大梯度粗篩，可以快速判斷樣品的整體峰分布。對簡單樣品通過梯度優化即可得到滿意譜圖，但對復雜樣品，除梯度優化，還需要考察色譜柱不同鍵合相及規格、添加劑濃度及種類、柱溫、流速等條件對分離結果的影響，才可以獲得一個滿意的結果。

注：本文分享自【沃特世技術服務】公眾號。