酶聯吸附法（ELISA）檢測霉菌

霉菌**主要是指霉菌在其所污染的食品或是飼料中產生的有毒代謝產物，在飼料的加工、運輸和貯存過程中都可能會產生。據統計，已知的霉菌**有300多種，常見的**有：黃曲霉**，玉米赤霉烯酮/F2**，赭曲**，T2**，煙曲霉**，赭曲霉**，嘔吐**，麥角**等。

霉菌**污染多為復合型，飼料中大多存在3種以上的霉菌**污染。霉菌**通過飼料或食品進入人和動物體內，引起人和動物的急性或慢性毒性，損害機體的肝臟、腎臟、神經組織、造血組織及皮膚組織等。因此，霉菌**的檢測必須引起重視，防患于未然。

霉菌**檢測方法

飼料中霉菌**檢測方法主要有目測法，薄層色譜法（TLC），高效液相色譜法（HPLC），酶聯**吸附法（ELISA），放射**法（KIA）及快速試紙檢測法。

其中酶聯**吸附法（ELISA）此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。經過三四十年發展，ELISA技術已經作為一個成熟的快速篩選方法，應用于不同的行業，美國USDA，EPA將眾多ELISA的方法作為官方快速篩選方法。

酶聯**吸附法（ELISA）

酶聯**吸附法（ELISA）的基本原理是，在合適的載體上，酶標記抗體或抗原與相應的抗原或抗體結合成酶標記抗體抗原復合物，在酶底物的參與下，復合物上的酶催化底物使其水解成為另一種帶色物質，其核心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色深淺來進行分析。

該法優點突出，1）靈敏度高，干擾小：抗體抗原的**反應特異性很強，結構類似物、熒光物質、有色物質對檢測的干擾很小。2）操作簡便快捷：由于特異性強，簡化了樣品的預處理和提取純化過程，同時測定時間短。3）**性高，污染少，成本低廉：不需要昂貴的測定儀器，且所用試劑也相對較少，**標準品的濃度可以很低，減少了對檢測人員和環境的潛在危害和污染。尤其適用于大批量樣品的快速測定。

試劑盒

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。根據待測物的情況及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。如：雙抗體夾心測抗原、雙抗體夾心測抗體、間接法測抗原、間接法測抗體、競爭法測抗原、競爭法測抗體等，目前的試劑盒大多屬于抗體包被直接競爭ELISA法。

目前國際上比較認可的霉菌**檢測模式是，試劑盒篩選加大型儀器確證方法配合使用。試劑盒應用于樣品的實驗室快速篩選，結果準確性比較高，對于大批量的樣品測定分析可有效節約成本，縮短分析時間。

試劑盒實驗示例

1，稱粉碎好的樣品5g

2，加入0.5gNaCl

3，加入25mL70%甲醇/水

4，超聲萃取5min

5，4000轉離心5min

6，離心后的樣品取上清液過玻璃纖維濾紙過濾

7，加入100ul的酶標記物到混合孔，再加入50ul的標準品及樣品到相應混合孔，混勻后轉移100ul到相應的測試孔中。加入50ul抗體到對應的每一個測試孔。